糖蛋白占人类蛋白质及多数生物制药产物的 50% 以上，糖基化作为关键且复杂的翻译后修饰，对调控生物过程至关重要。

2025年初，上海药物研究所的周虎研究员和文留青研究员联合在Analytical Chemistry期刊联合发表了一种结合质谱蛋白质从头测序技术解码未知糖蛋白的新方法：Decoding Protein Glycosylation by an Integrative Mass Spectrometry-Based De Novo Sequencing Strategy，方案设计见图1。Fetuin-A（UniProt Accession no.P12763）是一种含有唾液酸化 N糖和O糖的常用模型糖蛋白，作者首先基于Fetuin-A，用糖苷酶切除糖链后采集质谱数据，使用PEAKS^® AB完成蛋白质序列的自动组装，建立了糖蛋白的从头测序方法，可获得去糖基化蛋白的一级序列。

研究采用高度复杂的糖基化蛋白药物依那西普验证该方法性能，鉴定 3 种未知 TNFR:Fc 融合生物制剂的氨基酸序列并分析其与原研依那西普的相似性；同时从 N 糖基化位点、游离糖、糖蛋白亚单位、糖肽多层面完成深度糖基化表征，精确定位 N-/O – 糖基化。该方法弥补了从头测序与糖基化修饰分析的差距，可全面解析糖蛋白一级结构与糖基化修饰信息，在基础研究和生物制药行业均具备实用价值。

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacsau.4c00960?ref=PDF