免疫肽组学借助串联质谱分析 HLA 结合肽以挖掘 T 细胞靶点。目前主流 CID/HCD 碰撞解离可实现常规肽鉴定，但无法分辨同分异构的 Ile 与 Leu。
现有检索策略常将数据库中 Ile 统一替换为 Leu，该简化方式仅适用于参考序列已知场景；无参考数据库或存在非经典序列变异时需依靠从头测序，而 Ile/Leu 的 b/y 离子质荷比完全相同，CID/HCD 谱图极易发生序列误判。尽管 Ile、Leu 理化性质相近，但位点互换会改变生物学功能，二者的精准区分对生物制药十分关键。
EAD、ETD 等 ExD 电子碎裂技术可生成 d、w 特征离子鉴别 Ile/Leu，但 EAD 存在碎裂效率低、低电荷肽适配差、反应时间长等缺陷。虽已有 EThcD 等 ETD‑CID 联用提升碎裂效率的报道，却缺少免疫肽组学方向的系统性研究；天然免疫肽组的 Ile/Leu 变体分布规律，以及 CID 造成的序列鉴定偏差也尚未得到系统解析。
为解决上述问题，Anthony W. Purcell 团队于2026年5月在《Analytical Chemistry》发表题为Distinguishing Ile/Leu Variant Ligands in the Immunopeptidome Using Hybrid EAD + CID Fragmentation (ExCID)的研究论文。该研究利用EAD与CID结合的混合碎裂模式，完成方法开发、参数优化与实际样本验证，实现了对免疫肽中Ile/Leu变体的高效区分。
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